其他皮膚病醫(yī)院國營
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1.病原學(xué)檢查由于真菌廣泛分布于自然界,甚至空氣中也常有孢子飛揚,采集糞標(biāo)本和檢查操作中,應(yīng)盡可能減少污染,標(biāo)本要新鮮。有些真菌傳染性很強(qiáng)如莢膜組織胞漿菌,應(yīng)注意安全防護(hù),以免造成實驗室人員感染。
直接鏡檢標(biāo)本
以10%氫氧化鉀或生理鹽水制片,高倍鏡下發(fā)現(xiàn)大量菌絲和孢子有診斷意義。對于雙相型真菌,僅查到孢子可能是正常帶菌。真菌性腸炎的6種常見病原多數(shù)情況下直接鏡檢即可鑒定,但孢子、菌絲和其他背景物質(zhì)有時相互混淆,不易辨認(rèn)。
①菌絲和孢子:菌絲粗細(xì)一致,除毛霉菌外均有分隔,可見不同角度的分支,細(xì)胞質(zhì)均勻,內(nèi)含大小不等的顆粒。孢子多為圓形或卵圓形,多數(shù)大小一致,邊緣整齊,可見細(xì)胞構(gòu)造。
②細(xì)胞壁:在氫氧化鉀溶液處理的標(biāo)本中,細(xì)胞壁常變寬,連接成弧狀,類似菌絲,但無菌絲的構(gòu)造。
③石棉體:比菌絲更細(xì),不分節(jié),無菌絲顆粒。
④植物纖維:未消化的食物殘渣,邊緣不整,無分支。
⑤脂細(xì)胞:圓形,構(gòu)造模糊,無細(xì)胞壁。
⑥磷脂小球:大小不一,形狀不整,無細(xì)胞構(gòu)造。
⑦氫氧化鉀結(jié)晶:雪花樣或珊瑚狀,邊緣呈鋸齒形,折光性強(qiáng)。
⑧小水皰:圓形,透亮,無細(xì)胞構(gòu)造。
染色鏡檢常用的染色方法
①革蘭染色:適用于念珠菌,孢子、菌絲染成藍(lán)色,但著色不均。
②過碘酸錫夫染色(PA5):真菌孢子、菌絲均染成紅色。
③丫啶橙染色:熒光顯微鏡下真菌孢子呈亮綠色。
④吉姆薩染色和瑞特染色:適用于莢膜組織胞漿菌,染色前用甲醇固定,油鏡下菌體染成紅色,較小一端有出芽,菌體周圍有一圈莢膜樣結(jié)構(gòu),為此菌的細(xì)胞壁。通常菌體位于巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞內(nèi),少數(shù)位于細(xì)胞外。
⑤乳酸酚棉藍(lán)染色:適用于各種真菌培養(yǎng)涂片,菌體染成藍(lán)色。
真菌培養(yǎng)
糞標(biāo)本直接鏡檢通常不容易確定菌種,需參考糞培養(yǎng)結(jié)果,觀察菌落形態(tài),再挑取菌落染色后鏡檢。常用沙保培養(yǎng)基和血瓊脂培養(yǎng)基。對于雙相型真菌還需在不同溫度下(25℃或37℃)分別培養(yǎng),以便觀察其形態(tài)改變。
①大培養(yǎng):是鑒別真菌的主要方法之一,可觀察菌落的生長情況。根據(jù)菌落的生長速度、形態(tài)、色澤等,初步判別菌種。
A.試管斜面:用白金環(huán)刺破瓊脂平面,分3點將標(biāo)本接種于試管斜面培養(yǎng)基上。此法不易污染,但菌落較小。
B.培養(yǎng)皿:分3點將標(biāo)本接種于平皿培養(yǎng)基中央,倒置后放恒溫箱中培養(yǎng),每3天觀察1次菌落生長情況。
②小培養(yǎng):將大培養(yǎng)中生長較好的菌落接種在玻片培養(yǎng)基上。培養(yǎng)1~3天后,在顯微鏡下觀察菌體的特征。
A.點片法:先將少許培養(yǎng)基成形于載玻片中央,再將菌種接種于培養(yǎng)基邊緣。覆以蓋玻片,置于有U形管的玻璃平皿中,培養(yǎng)后于不同時間取出鏡下觀察或染色鏡檢。
B.壓片法:將菌種接種在試管斜面或平皿培養(yǎng)基上,覆一蓋玻片,以便菌體向蓋玻片上生長,然后于適當(dāng)時間取出置于載玻片上鏡檢。
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